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| 進(jìn)口elisa試劑盒顯色和比色分析 |
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| 點(diǎn)擊次數(shù)：795 更新時(shí)間：2018-01-25 |
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在進(jìn)口elisa試劑盒試驗(yàn)中各種酶標(biāo)儀功能都會(huì)有所不同，所以在運(yùn)用中應(yīng)具體閱讀說(shuō)明書(shū)，再進(jìn)行下一步操作。
自從20世紀(jì)60-70年代面世以來(lái)，Elisa法得到*科研工作者的認(rèn)可及推重，在歐美及我國(guó)取得很大的推行，尤其是國(guó)內(nèi)生化范疇的長(zhǎng)足發(fā)展。ELISA試劑盒有著準(zhǔn)確性高、靈敏度高、特異性強(qiáng)等許多的長(zhǎng)處，它在檢測(cè)抗體、抗原等方面有很好的運(yùn)用，深受廣闊用戶朋友的喜愛(ài)。但是，在試驗(yàn)過(guò)程中，也需求留意許多問(wèn)題，特別是顯色、比色問(wèn)題。
顯色
ELISA試劑盒顯色是ELISA中的終究一步溫育反響，此刻酶催化無(wú)色的底物生成有色的產(chǎn)品。反響的溫度和時(shí)刻仍是影響顯色的要素。在一定時(shí)刻內(nèi)，陰性孔可堅(jiān)持無(wú)色，而陽(yáng)性孔則隨時(shí)刻的延伸而呈色加強(qiáng)。恰當(dāng)提高溫度有助于加快顯色進(jìn)行。在定量測(cè)定中，參加底物后的反響溫度和時(shí)刻應(yīng)按規(guī)則力求準(zhǔn)確。定性測(cè)定的顯色可在室溫進(jìn)行，時(shí)刻一般不需求嚴(yán)格控制，有時(shí)可根據(jù)陽(yáng)性對(duì)照孔和陰性對(duì)照孔的顯色恰當(dāng)縮短或延伸反響時(shí)刻，及時(shí)判別。
OPD（鄰苯二胺）底物顯色一般在室外溫或37℃反響20-30分鐘后即不再加深，再延伸反響時(shí)刻，可使本底值增高。OPD底物液受光照會(huì)自行變色，顯色反響應(yīng)避光進(jìn)行，顯色反響結(jié)束時(shí)參加停止液停止反響。OPD產(chǎn)品用硫酸停止后，顯色由橙黃色轉(zhuǎn)向棕黃色。
TMB（四甲基聯(lián)苯胺）受光照的影響不大，可在室溫中置于操作臺(tái)上，邊反響觀察成果。但為確保試驗(yàn)成果的安穩(wěn)性，宜在規(guī)則的恰當(dāng)時(shí)刻閱讀成果。TMB經(jīng)HRP作用后，約40分鐘顯色達(dá)高峰，隨即逐漸削弱，至2小時(shí)后即可*消退至無(wú)色。TMB的停止液有多種，疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉（SDS）等酶抑制劑均可使反響停止。這類停止劑尚能使藍(lán)色維持較長(zhǎng)時(shí)刻（12-24小時(shí)）不褪，是目視判別的杰出停止劑。此外，進(jìn)口elisa試劑盒各類酸性停止液則會(huì)使藍(lán)色轉(zhuǎn)變成黃色，此刻可用特定的波長(zhǎng)（450nm）測(cè)讀吸光值。
比色
比色前應(yīng)先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體，然后將板正確放入酶標(biāo)比色儀的比色架中。以軟板為載體的試驗(yàn)，需先將板置于規(guī)范96孔的座架中，才可進(jìn)行比色。在加底物液顯色前，先將軟板邊際剪凈，這樣，此板就可*平妥坐入座架中。
比色時(shí)應(yīng)先以蒸餾水校零點(diǎn)，測(cè)讀底物孔（未經(jīng)任何反響僅加底物液的孔）和空白孔，以記載本次試驗(yàn)的試劑情況。這以后可用空白孔以蒸餾水校零點(diǎn)，以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度，然后進(jìn)行核算。
比色成果的表達(dá)以往通用光密度（oplical density，OD），現(xiàn)按規(guī)則用吸光度（absorbence，A），兩者意義相同。一般的表明辦法是，將吸收波長(zhǎng)寫(xiě)于A字母的右下角，如OPD的吸收波長(zhǎng)為492nm，表明辦法為“A492nm”或“OD492nm”。
進(jìn)口elisa試劑盒測(cè)讀A值時(shí)，要選用產(chǎn)品的靈敏吸收峰，如OPD用492nm波長(zhǎng)。有的酶標(biāo)儀可用雙波長(zhǎng)式測(cè)讀，即每孔先后測(cè)讀兩次，*次在zui適波長(zhǎng)（W1），第2次在不靈敏波長(zhǎng)（W2），兩次測(cè)定間不移動(dòng)ELISA板的方位。例如OPD用492nm為W1，630nm為W2，終究測(cè)得的A值為兩者之差（W1-W2）。雙波長(zhǎng)式測(cè)讀可削減由容器上的劃痕或指印等造成的光攪擾。
p21激活激酶4IgG 小鼠生長(zhǎng)激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)
P27/周期素依賴激酶抑制劑IgG 小鼠生長(zhǎng)激素釋放多肽(GHRP)
P2Y1受體IgG 小鼠腎損傷分子1(Kim-1)
P2Y4受體IgG 小鼠腎素(Renin)
p53凋亡刺激蛋白1IgG 小鼠腎上腺髓質(zhì)素(ADM)
P53凋亡刺激蛋白2IgG 小鼠腎上腺素能a1A受體(ADRA1A)
p53正向細(xì)胞凋亡調(diào)控因子IgG 小鼠腎上腺素(EPI)
p58ipkIgG 小鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子4(NT-4)
p70S6KbIgG 小鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3(NT-3)
進(jìn)口elisa試劑盒 |
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