在生化分析測(cè)量中，酶的測(cè)定比較復(fù)雜，要求條件較高，測(cè)試比較困難。一般生化分析儀只要酶的測(cè)定準(zhǔn)確，重復(fù)性好，其它項(xiàng)目的測(cè)定一般都會(huì)沒有問題。現(xiàn)就生化分析儀酶分析中常見的測(cè)試不準(zhǔn)確、重復(fù)性差的幾點(diǎn)原因進(jìn)行分析，以供使用者和維修工程師參考。
生化分析儀酶的測(cè)定一般用動(dòng)力學(xué)法進(jìn)行測(cè)試，其原理是在酶反應(yīng)的zui適條件下，用物理、化學(xué)或酶促反應(yīng)的分析方法，在反應(yīng)速度恒定期與被測(cè)物的活性或濃度成正比。計(jì)算方法有兩種：
1）法：
酶活力（U/L）＝ΔA×（反應(yīng)液體積/樣品體積）×（1000/消光系數(shù)）
2）相對(duì)法：
（U/L或mmol/L）＝［ΔA（測(cè)定）/ΔA（標(biāo)準(zhǔn)）］×標(biāo)準(zhǔn)物的活力或濃度
因此，生化分析儀酶的測(cè)定與許多條件有關(guān)。條件的設(shè)置，如：波長(zhǎng)、溫度、參數(shù)、測(cè)試方法，延遲和測(cè)試時(shí)間，吸液量等。另外還與的試劑，樣品的采集、保存有關(guān)，同時(shí)與及時(shí)進(jìn)行質(zhì)控，從一個(gè)樣品進(jìn)入另一個(gè)樣品測(cè)試時(shí)及時(shí)清洗也有很大關(guān)系。
例如GPT的測(cè)試一般選擇為：波長(zhǎng)為340nm，測(cè)定時(shí)間為20秒，延遲時(shí)間為40秒，吸液量為350μl，溫度設(shè)定為37℃，試劑空白可任意選擇。
因此GPT的測(cè)試結(jié)果與以下幾點(diǎn)有關(guān)：
1、340nm為波長(zhǎng)低端，能量較低，同時(shí)340nm濾光片使用較多，易老化。所以波長(zhǎng)漂移不準(zhǔn)，半寬度變化都會(huì)影響測(cè)量的準(zhǔn)確度和重復(fù)性。
2、動(dòng)態(tài)法測(cè)試有延遲時(shí)間，測(cè)試時(shí)間要求。延遲時(shí)間在動(dòng)態(tài)法中為預(yù)反應(yīng)時(shí)間，測(cè)試時(shí)間在動(dòng)態(tài)法中為測(cè)試的總時(shí)間。零級(jí)動(dòng)力學(xué)法是針對(duì)特定時(shí)間段而言的，酶反應(yīng)剛啟動(dòng)時(shí)反應(yīng)比較復(fù)雜，雜反應(yīng)較多，必需經(jīng)過一段延遲時(shí)間才能進(jìn)入穩(wěn)定反應(yīng)期，各試劑商對(duì)這兩段時(shí)間有嚴(yán)格規(guī)定。所以動(dòng)態(tài)法測(cè)試一般溫度在37℃，延遲時(shí)間不少于15秒為好。
3、對(duì)于參數(shù)的輸入應(yīng)按試劑要求輸入其給定值，一般試劑商在試劑盒說明書中給予說明。
4、反應(yīng)溫度。
5、測(cè)試空白要準(zhǔn)確。
6、吸液量的大小直接影響交叉污染和測(cè)量的重復(fù)性，建議測(cè)試污染性大的物質(zhì)試劑量應(yīng)相應(yīng)增加。一般應(yīng)大于400μl，一般項(xiàng)目為500μl即可。
7、測(cè)試不準(zhǔn)確、重復(fù)性差從操作上看主要有：儀器本身原因如比色杯中有氣泡；光源燈老化；光源電壓不穩(wěn)；340nm濾光片性能變差，透射性變小；波長(zhǎng)不準(zhǔn)確等有關(guān)。一般檢查液路接口是否松動(dòng)漏氣，更換光源燈泡和340nm濾光片即可解決。至于電路問題，加熱元件損壞，溫度不受控的問題只能由工程師解決。
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