客户只需提供样品和待检测基因名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。 产品名称 | 变形丝囊霉菌探针法荧光PCR检测试剂盒 | 英文名称 | Aphanomyces astaci | 货号 | YSP96377 |
荧光定量PCR试剂盒技术：
产品仅用于科研本实用新型技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒，包括盒体，盒体由上盒体和下盒体组成，上盒体的底面上设有限位凸起，下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽，且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖，侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾，下盒体的上端边缘处设有环形凸起，两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上；凹槽的内部设有固定杆，固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架；下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型技术通过将盒体分为上下组合的两个部分，并将两个部分通过侧盖连接，即可保证试剂盒的便携性，同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。
样品RNA的抽提：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其*溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其*溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA质量检测
1）紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
① 浓度测定
A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为：A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。
美西林/氮脒青霉素C6H13NO5, 7-二氟喹啉 甲羟孕酮/安宫黄体素C33H24O107-氯咪唑并[1,2-A]吡啶 甲羟孕酮(标准品)C10H11NO2-基酸乙酯 甲巯咪唑/他巴唑/2-巯基-1-甲基咪唑C20H34O4异硫酸己酯 甲巯咪唑(标准品)C8H8O4甲基环己 美索巴莫C9H10O52-亚甲基-1, 美索巴莫（标准品）C16H18O9码啉酸四甲基二酯 甲基泼尼松龙C20H28O32,二氯-氟 甲基泼尼松龙（标准品）C15H10O52-甲氧基-(三氟甲氧)甲 盐酸美西律（慢心率）C30H50O甲砜霉素棕榈酸酯 盐酸美西律（标准品）C27H28N2O42(5H)-呋喃酮 美洛西林钠C9H10O4氨基-2-羟基吡啶 美洛西林钠(标准品)C20H18O11糠酸 米非司酮C19H28O12氟-2-甲酸 米非司酮（标准品）C12H22O112,5-二羟基磺酸 米氮平C9H8O3N-(2-二乙氨基乙基)-1-萘草酸盐 米氮平(标准品)C28H44O邻乙二 5-氟清酸；5-FOAC21H20O10恶唑-甲
变形丝囊霉菌探针法荧光PCR检测试剂盒核因子κB(NF-κB)ELISA试剂盒CD138/Syndecan-1 多配体蛋白聚糖1抗体100 ul 核因子E2相关因子2(Nrf2)ELISA试剂盒CD146/MCAM 黑色素瘤细胞粘附分子CD146抗体100 ul 核糖核酸酶,核糖核酸酶A家族(肝脏,嗜酸性粒细胞源性神经毒素)(RNASE2)ELISA试剂盒CD141/THBD 凝血调节蛋白抗体100 ul 含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪氨酸激酶2(Tie-2)ELISA试剂盒CD13/ANPEN CD13氨肽酶N抗体100 ul 含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪氨酸激酶1(Tie-1)ELISA试剂盒CD14 内毒素受体抗体500 ul 过氧化脂质/过氧化物酶(LPO)ELISA试剂盒CD27/TNFRSF7 CD27抗体100 ul 过氧化物酶体增殖因子活化受体γ( PPAR-γ)ELISA试剂盒CD28 CD28抗体100 ug 过氧化物酶体增殖因子活化受体β(PPAR-β)ELISA试剂盒CD144/VECD 上皮型钙粘附分子抗体100 ul 过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)ELISA试剂盒CD147/TCSF 细胞外基质金属蛋白酶诱导因子抗体100 ul
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．产品仅用于科研所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。 |
